Authentication
440x Tipe PPT Ukuran file 4.12 MB Source: fatchiyah.lecture.ub.ac.id
Uji kuantitatif DNA dengan spektrofotometri
UV-Vis, DNA murni dapat menyerap cahaya
ultraviolet karena keberadaan basa-basa
purin dan pirimidin. Pita ganda DNA dapat
menyerap cahaya UV pada 260 nm, sedang
kontaminan protein atau phenol akan
menyerap cahaya pada 280 nm.
Sehingga kemurnian DNA dapat dukur
dengan menghitung nilai absorbansi 260
nm dibagi dengan nilai absorbansi 280
(Å260/Å280), dan nilai kemurnian DNA
berkisar antara 1.8-2.0.
Uji Kuantitatif
Uji Kuantitatif
NanoDrop
Serta untuk mengukur konsentrasi DNA
digunakan rumus sebagai berikut:
[DNA] = Å260 x 50 x faktor pengenceran
Å = Nilai absorbansi pada 260 nm
260
50 = larutan dengan nilai absorbansi 1.0
sebanding dengan 50 ug untai ganda DNA
per ml (dsDNA)
[RNA] = Å260 x 40 x faktor pengenceran
40 = 40ug/ml untai tunggal RNA (ssRNA)
Mengukur Konsentrasi DNA/RNA
Mengukur Konsentrasi DNA/RNA
Metoda standar yang digunakan untuk
memisahkan, mengidentifikasi dan
memurnikan fragmen DNA adalah
elektroforesis gel agorose.
Teknik ini sederhana, cepat terbentuk, dan
mampu memisahkan campuran potongan
DNA sesuai dengan ukurannya secara
akurat, dibanding dengan densitas
gradient sentrifugasi.
Selanjutnya, lokasi DNA dalam gel
tersebut dapat diidentifikasi secara
langsung dengan menggunakan pewarna
berfluorescen.
Uji Kualitatif
Uji Kualitatif 08/01/22 fatchiyah, JB-UB 4
Agarose Gel Electrophoresis
Purification for Specific Fragment of DNA
-DNA Electro-elution
-Electrophoresis onto DEAE-cellulose
membranes
Polyacrylamide Gels
Pulse-field Gel Electrophoresis (PFGE)
http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/gel/
Electrophoresis for nucleic acid
Electrophoresis for nucleic acid
08/01/22 fatchiyah, JB-UB 5
The equipment and supplies necessary
for conducting agarose gel
electrophoresis are relatively simple and
include:
An electrophoresis chamber and power
supply
Gel casting trays, which are available in a
variety of sizes and composed of UV-
transparent plastic. The open ends of the trays
are closed with tape while the gel is being
cast, then removed prior to electrophoresis.
Sample combs, around which molten agarose
is poured to form sample wells in the gel.
Preparing and Running Standard
Preparing and Running Standard
Agarose DNA Gels
Agarose DNA Gels 08/01/22 fatchiyah, JB-UB 6
no reviews yet
Please Login to review.