Authentication
261x Tipe PPT Ukuran file 4.12 MB Source: fatchiyah.lecture.ub.ac.id
Uji kuantitatif DNA dengan spektrofotometri UV-Vis, DNA murni dapat menyerap cahaya ultraviolet karena keberadaan basa-basa purin dan pirimidin. Pita ganda DNA dapat menyerap cahaya UV pada 260 nm, sedang kontaminan protein atau phenol akan menyerap cahaya pada 280 nm. Sehingga kemurnian DNA dapat dukur dengan menghitung nilai absorbansi 260 nm dibagi dengan nilai absorbansi 280 (Å260/Å280), dan nilai kemurnian DNA berkisar antara 1.8-2.0. Uji Kuantitatif Uji Kuantitatif NanoDrop Serta untuk mengukur konsentrasi DNA digunakan rumus sebagai berikut: [DNA] = Å260 x 50 x faktor pengenceran Å = Nilai absorbansi pada 260 nm 260 50 = larutan dengan nilai absorbansi 1.0 sebanding dengan 50 ug untai ganda DNA per ml (dsDNA) [RNA] = Å260 x 40 x faktor pengenceran 40 = 40ug/ml untai tunggal RNA (ssRNA) Mengukur Konsentrasi DNA/RNA Mengukur Konsentrasi DNA/RNA Metoda standar yang digunakan untuk memisahkan, mengidentifikasi dan memurnikan fragmen DNA adalah elektroforesis gel agorose. Teknik ini sederhana, cepat terbentuk, dan mampu memisahkan campuran potongan DNA sesuai dengan ukurannya secara akurat, dibanding dengan densitas gradient sentrifugasi. Selanjutnya, lokasi DNA dalam gel tersebut dapat diidentifikasi secara langsung dengan menggunakan pewarna berfluorescen. Uji Kualitatif Uji Kualitatif 08/01/22 fatchiyah, JB-UB 4 Agarose Gel Electrophoresis Purification for Specific Fragment of DNA -DNA Electro-elution -Electrophoresis onto DEAE-cellulose membranes Polyacrylamide Gels Pulse-field Gel Electrophoresis (PFGE) http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/gel/ Electrophoresis for nucleic acid Electrophoresis for nucleic acid 08/01/22 fatchiyah, JB-UB 5 The equipment and supplies necessary for conducting agarose gel electrophoresis are relatively simple and include: An electrophoresis chamber and power supply Gel casting trays, which are available in a variety of sizes and composed of UV- transparent plastic. The open ends of the trays are closed with tape while the gel is being cast, then removed prior to electrophoresis. Sample combs, around which molten agarose is poured to form sample wells in the gel. Preparing and Running Standard Preparing and Running Standard Agarose DNA Gels Agarose DNA Gels 08/01/22 fatchiyah, JB-UB 6
no reviews yet
Please Login to review.